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    95娱乐小编为你继续讲解流式细胞仪的调试和使用
    日期【2016-06-24 08:35】 共阅:【】次

    95娱乐医学继续为你讲解流式细胞仪的调试和使用。

     调试和校准

    流式细胞仪在使用前 ,甚至在使用过程中都要精心进行调试,以保证工作的可靠性和最佳性 。调试的项目主要是激光强度 、液流速度和测量区的光路等 。
    激光强度:除调整反射镜的角度以调整到所需波长的激光出光外,还要结合显示屏上的光谱曲线使激光的强度输出为最大 。
    液流速度:可通过操作台数字显示监督 ,调节 气体压力大小以获得稳定的液流速度 。
    测量区光路调节 :这是调试工作的关键 。需要保证在测量区的液流 、激光束 、90散射测量光电系统垂直正交,而且交点较小 。一般可在用标准荧光微球等校准中完成 。
    流式细胞术中所测得的量是相对值,因此需要在使用前或使用中对系统进行校准或标定,这样才能通过相对测量获得绝对的意义。因而FCM中的校准具有双重功能:仪器的准直调整和定量标度。标准样品应该稳定,有形成份形状应是大小比较一致球形 ,样品分散性能良好 ,且经济 、容易获得。常用标准荧光微球作为非生物学标准样品 ,鸡血红细胞做为生物学标准样品。微球用树脂材料制作,或标有荧光素 ,或不标记荧光素。所用的鸡血红细胞标准样品制作过程昭下:取3.8%枸橼酸或肝素抗凝的鸡血(抗凝剂 :鸡血=1 :4),经PBS清洗3次,再用5~10ml的1.0%戊二醛与清洗后的鸡红细胞混合,室温下振荡醛化24h ,最后经PBS再清洗 ,贮4℃冰箱中备用 。需要指出的是因为未经荧光染色,所测光信号为鸡血红蛋白的自发荧光。
    仪器的操作和使用
    ①打开电源,对系统进行预热;
    ②打开气体阈,调节 压力,获得适宜的液流速度 ;开启光源冷却系统 ;
    ③在样品管中加入去离子水,冲洗液流的喷嘴系统;
    ④利用校准标准样品,调整仪器,使在激光功率 、光电倍增管电压、放大器电路增益调定的基础上,0和90散射的荧光强度最强,并要求变异系数为最小;
    ⑤选定流速、测量细胞数、测量参数等 ,在同样的工作条件下测量样品和对照样品 ;同时选择计算机屏上数据的显示方式,从而能直观掌握测量进程;
    ⑥样品测量完毕后,再用去离子水冲洗液流系统;
    ⑦因为实验数据已存入计算机硬盘(有的机器还备有光盘系统,存贮量更大),因此可关闭气体、测量装置 ,而单独使用计算机进行数据处理;
    ⑧将所需结果打印出来 。
    操作和使用中的注意事项
    1)光电倍增管要求稳定的工作条件 ,暴露的较强的光线下以后,需要较长时间的“暗适应”以消除或降低部分暗电流本底才能工作;另外还要注意磁屏蔽;
    2)光源不得在短时间内(一般要1h左右)关上又打开 ;使用光源必须预热并注意冷却系统工作是否正常 ;
    3)液流系统必需随时保持液流畅通 ,避免气泡栓塞 ,所使用的鞘流液使用前要经过过滤 、消毒 ;
    4)注意根据测量对象的变换选用合适的滤片系统、放大器的类型等;
    5)特别强度每次测量都需要对照组 。
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